SEP SNEST DGEST
PRACTICA I:
EXTRACCIÓN Y SEPARACIÓN DE ADN
QUE PRESENTA:
Arisbeth Salgado Mendoza
09930054
Lic. BIOLOGIA VI "A"
Ciudad Altamirano, Gro.
México. MARZO del 2012
RESUMEN:
El proceso de extracción del ADN sigue ciertas pautas para su correcta purificación que son muy diferentes a los empleados en la purificación de proteínas, lo que refleja las diferencias básicas en la estructura de estos dos tipos de macromoléculas. El primer paso en la purificación del ADN por lo general consiste en homogeneizar las células y aísla los núcleos de los cuales se extrae el ADN. El medio de extracción ordinario contiene un detergente (SDS); a continuaciones le agrega solución de te para resuspender el ADN, luego los ácidos nucleicos se precipitan añadiendo etanol .Para concluir el análisis de la extracción del ADN hay que resaltar que e n este proceso ocurre una lisis celular lo cual significa que el ADN queda libre por consiguiente hay que protegerlo de las enzimas porque estas podrían degradarlo . Todos los tipos de
macromoléculas biológicas tienen una característica en común que va a permitir
el desarrollo de un método de separación específico para ellas. Estos métodos
deben ser completamente biocompatibles para que puedan ser posteriormente
útiles al investigador y, al mismo tiempo, lo suficientemente potentes para
permitir el aislamiento de la molécula deseada de entre un mezcla compleja de multicomponentes
que hacen las veces de “contaminantes” de nuestra molécula en cuestión.
INDICE:
AGRADECIMIENTOS....................................................................... 1
RESUMEN......................................................................................... 2
ANTECEDENTES............................................................................ 4
DEFINICIÓN DEL PROBLEMA............................................................... 5
OBJETIVO.................................................................................................... 6
JUSTIFICACIÓN.............................................................................................. 7
FUNDAMENTO TEÓRICO................................................................................... 8
MATERIALES Y MÉTODOS............................................................................... 9
RESULTADOS................................................................................................... 10
CONCLUSIONES Y RECOMENDACIONES....................................................... 11
FUENTES CONSULTADAS.................................................................................. 12
ANTECEDENTES:
Ademas del agua, los carbohidratos, las proteínas y los lipidos, los seres vivos están constituidos por otras moléculas que, aunque en menor cantidad, desempeñan funciones muy importantes.
Los ácidos nucleicos (DNA Y RNA) son biomoleculas solubles en agua que desempeñan funciones diversas, son moléculas complejas producidas por las células vivas; son esenciales para todos los organismos vivos. Estas moléculas gobiernan el desarrollo del cuerpo y sus características especificas, ya que proporcionan la información hereditaria y ponen en funcionamiento la producción de proteínas.
DEFINICIÓN DEL PROBLEMA:
Extraer y separar el ADN de los siguientes elementos:
- Hígado
- Sangre
OBJETIVO:
Extraer DNA y RNA de tejidos animales o vegetales e identificarlos como tales.
JUSTIFICACIÓN:
Con esta practica analizaremos detenida mente como poder extraer el ADN de un compuesto de nuestro organismo y así identificar realmente su contenido y compocision de es, también aprenderemos para así nosotros analizar las muestras a lo largo de nuestra carrera.
FUNDAMENTO TEÓRICO:
El proceso de extracción del ADN sigue ciertas pautas para su correcta purificación que son muy diferentes a los empleados en la purificación de proteínas, lo que refleja las diferencias básicas en la estructura de estos dos tipos de macromoléculas.
MATERIALES Y MÉTODO:
- Tubos de centrifuga 1ml
- Tubos de ensayo de 5ml.
- Centrifuga
- Micropipetas de 1000 y 200ul
- Agua destilada estéril (20ml para todos)
- Etanol al 100% frió (20ml es suficiente)
- NaCL 3M
- Buffer de extracción de ADN (Urea, NaCL, EDTA, 20ml es suficiente para todos)
- Fenol frio (20ml es suficiente, manejase con guantes)
- Mortero y pistilo
- Hígado y Sangre
- Papel aluminio
- Cleenpack
- Guantes
- Colocamos 1gr. de hígado en el mortero y lo molimos hasta quedar bien batido, lo colocamos en el tubo de eppendorf a 0.05ml, los colocamos en la base que adaptamos de unicel.
2. Con la pipeta de mano colocamos en el buffet de extracción y lo colocamos en cada uno de los tubos, agitamos los tubos durante 10 minutos, continuamos agregar fenol a 500ml y los volvemos agitar por 5 minutos.
3. Los introducimos a la centrifuga a 10000 revoluciones por 5 minutos.
4. De la centrifuga en los tubos observamos lipidos, proteínas, una pequeña capa de carbohidratos y los ácidos nucleicos y hacemos nueva mente otra separación en otro tubo extraemos solo los ácidos nucleicos pero ahora agregando Etanol 400 frió a 400ml y NaCL a 45 M. Lo agitamos nuevamente por otros 10 minutos y lo agregamos a la centrifuga por 10000 revoluciones por 2 minutos a la temperatura de 18ºC.
5. Lo extraemos de la centrifuga y tiramos el restante del tubo y solo dejamos el ADN (la pastillita) observada.
6. Se rotulo el tubo de "la pastillita" y se guardo en el refrigerador.
RESULTADOS:
Observamos la separación de los lipidos, proteínas, carbohidratos y los ácidos nucleicos y como podemos separar el ADN de un compuesto de nuestro cuerpo fácilmente. El producto obtenido de la extracción no es ADN puro ya
que, entremezclado con él, hay fragmentos de ARN.
CONCLUSIONES Y RECOMENDACIONES:
Logramos observar las composiciones del hígado y de la sangre y como separar el ADN.
FUENTES CONSULTADAS:
- http://html.rincondelvago.com/extracion-del-adn-genomico-y-electroferesis-en-gel.html
- http://vanguardia.udea.edu.co/cursos/Ingenieria%20genetica/Clase%20Nov11/Extraccion%20de%20acidos%20nucleicos/Soluciones-QPCR-protocolos.pdf
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